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羊乳中摻加牛乳之快速檢測

國立宜蘭技術學院應用動物系／曹博宏

　　羊乳在台灣被視為是養生食品，而其售價遠比牛乳高2倍以上，許多不肖商人為了圖利，可能於羊乳中摻假牛乳進行販賣。此外，少數生產兼經營的個體養羊戶，在產量波動不足以供應訂戶時，也有可能添加牛乳應急。羊乳中添加牛乳除了誠信問題與不合法外，也可能對某些會對牛乳過敏的人健康造成危害。因此，如何確保市售羊乳之品質實為當務之急。

　　目前衛生署所採用之檢驗方法為CNS 14117 N6304（1998）之乳品檢驗法。該法乃利用尿素電泳法檢測，其中之操作過程需先分離酪蛋白，步驟繁瑣、耗時且檢驗成本較高。此外，亦有使用高效率液相層析法(HPLC)鑑試者，然而其效果亦不佳且儀器設備昂貴。近年來，利用抗體特異性而發展出的酵素免疫分析法(ELISA)，是新興快速靈敏的檢測方法，且有許多配合的試劑與儀器提供檢驗，使其方法更加簡易且完善。然而其先決條件是需有待檢物的特異性抗體。目前市面上已有相關的偵測套組上市(R-Biopham GmbH, Darmstadt, Germany)，然而是否能針對台灣本土之需求以改善其靈敏度與可信度，以及如何降低檢驗成本，仍值得進一步發展。今擬就本實驗室研究改良之羊乳中牛乳快速檢出技術及其未來可應用方向做進一步介紹。

羊乳中摻加牛乳之檢出

1. 利用迷你SDS-PAGE檢測羊乳中摻入牛乳含量：

　　本實驗室已製備牛乳特有蛋白之單源抗體，並發展為簡易靈敏的酵素免疫分析法。然各實驗室受限於抗體取得不易，而SDS-PAGE是目前大部分實驗室均具有之設備，且許多廠商亦已開發自動化電泳與染色設備及現成凝膠。因此，如能以SDS-PAGE做為輔助檢測羊乳中添加牛乳之方法，將可增加方便性及普及性。本法以15% SDS-PAGE分析羊乳與牛乳之主要酪蛋白差異，不僅將前處理過程大為精減，且亦將CNS中原用之電泳部分予以改良，可快速準確檢測出羊乳中牛乳之添加量，其中若以coomassie blue染色法可檢出2%牛乳添加量，而以銀染色法則靈敏度更可達1% (如圖1)，本法亦適用於羊乳中摻加還原脫脂牛乳之檢出(如圖2)，可大幅縮減檢測品管流程。

Mol.	羊	1%	2%	5%	10%	20%	牛	Mol.	羊	0.5%	1%	2%	5%	10%	牛
Std.	乳						乳	Std.	乳						乳

▲圖2.脫脂羊乳依比例分別攙1，2，5，10，20%還原脫脂牛乳之凝膠電泳染色。

2. 以融合瘤技術製備牛乳特有蛋白單源抗體以檢測羊乳摻假牛乳：

　　目前本實驗室更利用融合瘤技術製備出一種牛乳特有33KD蛋白抗體(如圖3)。利用專一細胞株（16A5）所產生之單源抗體，可開發出更簡易、快速且準確之改良檢測法。根據我們檢測的結果証實，利用此單源抗體以non-competetive ELISA檢測羊乳中牛乳的含量，可有效偵測到0.2﹪以上之牛乳摻入量(如圖4)，未來如能再加以改良為雙抗體結合ELISA（Sandwich immunoassay），靈敏度將可更為提昇。本法將使羊乳中摻假牛乳之行為無所遁形。

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