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保存細胞:桃園豬胚 (Embryo of Taoyuan Pig)


保存場地: 台灣省畜產試驗所
台南縣新化鎮牧場路 112 號
電話:(06)5911211
傳真:(06)5911210
聯 絡 人: 陳立人先生 許登造博士

桃園豬胚冷凍保存:

  利用甘油為冷凍保護劑,採行緩慢降溫的 方式,將桃園豬胚冷凍保存於液氮中。 其製作方法及流程如下:

桃園豬孵化囊胚(Hatched blastocyst)

以 16% FCS/PBS 洗淨

浸漬於 0.25M glycerol/PBS 中,10 分鐘

浸漬於 0.5M glycerol/PBS 中,10 分鐘

浸漬於 1.0M glycerol/PBS 中,10 分鐘

裝入 0.25ml 之麥管中

以每分鐘降 1℃ 的速率降溫到 -6.8℃

植冰,維持 -6.8℃ 達 10 分鐘

以每分鐘降 0.3℃ 的速率降溫到 -35℃

直接投入液氮中保存

解凍方式:

  1. 將麥管自液氮中取出,直接投入37℃溫水中。待內容物融解後,將之擠出於錶玻璃上。
  2. 將胚尋出,移到 0.55M glycerol/PBS ,保持 10 分鐘。
  3. 將胚移入0.25M glycerol/PBS 中,保持 10 分鐘。
  4. 將16% FCS/PBS 以逐滴加入的方式加入到含有 胚的 0.25M glycerol/PBS 中。
  5. 將胚以 16% FCS/PBS 洗淨,即可做胚移置或 培養觀察。


解凍後存活的豬囊胚

 

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