台灣畜產種原知識庫

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表5. 國際上已公佈的豬基因圖譜
圖譜名稱			PigMaP 第一版	Nordic 第一版	Nordic 第二版	USDA-MARC 第一版	USDA-MARC 第二版
參考文獻			Archibald et al.,1995	Ellegren et al.,1994	Marklund et al.,1996	Rohrer et al.,1994	Rohrer et al.,1996
第一型遺傳標記
	瑞福利		59	34	47	7	18
	基因內微衛星型		14	17	16	8	28
	單股結構型		3		1
	毛色等外表型				3
	蛋白質型		7	11	11
	血型		6	10	11
	小計		89	72	89	15	46

第二型遺傳標記
		微衛星型	143	1	135	369	996
		迷你衛星型	6	51	8
		其他	6	4	7
		小計	152	56	150	369	996
總計			241	128	239	384	1042

豬基選：Ⅰ. 種母豬群之遺傳純合度評估

豬的基因定位與遺傳標記輔助選拔(簡稱豬基選)對豬隻經濟性狀檢定作業，提供了一項階梯式遺傳組成的選育契機。種豬的遺傳表現穩定度或其潛能預測應在相同的遺傳標記上進行比較，如此，不僅可節省檢定投資，尚可藉以選育經濟性狀基因座遺傳同源品系。台灣省畜產試驗所核心種豬場和三家民間純種豬場在養的2,098頭經產母豬，經以系譜追蹤分析，發現僅有17.8％(374/2098)的在養種母豬之雌親祖先可推前三代。若依品種區分時，則藍瑞斯(L）、約克夏(Y)和杜洛克(D)種的在養種母豬分別有15.0％(174/1163)、24.7％(81/328)和19.6％(119/607)之雌親祖先可推前三代，暗示種母豬群延續其遺傳組成給後裔的能力偏低，此可由每頭母豬經三代後的在養後裔母豬頭數得知，其中L、Y和D 品種分別有2.64、2.31和2.25 頭，顯然較理論預估值8頭為低（2³世代）。可是仍有些母豬經五代後，其目前在養後裔母豬頭數高於預估值32頭（2⁵世代），在L、Y和D品種分別有2、0和1頭，而L品種的兩頭是母女關係，L64 -1009-00的後裔在養母豬頭數多達50頭。顯示這些種母豬的遺傳組成可穩定地被傳遞給後代且表現整齊。檢測種母豬群之遺傳整齊度或遺傳純合度是豬基選工作的基石，故進一步以雌親遺傳的細胞質粒線體DNA（mtDNA）片段型（mtDNA）來追蹤其中315頭在養種母豬傳遞遺傳組成的穩定性。豬mtDNA經BglⅡ分切後，L和D母豬為參片段型，而Y母豬為單片段型居多，但有0.6％（1/177）的L母豬為單片段型，12.7％（7/55）的Y母豬為參片段型，以及7.2％（6/83）的D母豬為單片段型和10.9％（9/83）的D母豬為雙片段型。顯示L母豬之雌親源較Y和D母豬者純合。應用醋酸纖維膜電泳分析其中的1,762頭在養種母豬之GPI和PGD遺傳型，並計算L、Y和D母豬群裡具有GPI/PGD純合型（AA/AA，AA/BB，BB/AA和BB/BB）的母豬比率時，分別有30.94、27.76和33.46％(張等, 1994)。

豬基選：Ⅱ. 第六對染色體、上CRC突變基因對母豬繁殖之影響

豬緊迫基因或稱鹵乙烷基因在豬基因定位上，已確認為CRC（鈣離子釋放管道）基因，在其已知的15015bp的核甞序列上，其第1843個核甞酸若為T者則為CRC突變基因；若為C者則為CRC正常基因。檢測已用鹵乙烷測試技術的抗緊迫母豬群369頭，有69.1％的母豬為CC型，另30.9％為CT型。比較CRC遺傳型僅差一突變基因的兩母豬群之繁殖記錄，發現在十一月齡至兩歲齡間，CT型母豬的淘汰死亡率為29.1％(33/114），明顯地高於CC型母豬的19.6％（50/255)(P＜0.05）。以母豬出生月份和CRC遺傳型為變方，CC（N=211）和CT型（N=92）母豬之初產日齡分別為382±4和380±6天（P＞0.79)，初產每胎有8.53±0.22和7.80±0.35頭仔豬（P＞0.08）。第二胎與初產之胎距在CC型母豬為168±2天，CT型母豬為173±4天。第三胎與第二胎之胎距在CC型母豬為154±1天，CT型母豬為154±3天。以品種、CRC遺傳型和產次為變方時，則CT型母豬平均每胎產下8.88±0.20頭仔豬（N=297胎），而CC型母豬平均每胎產9.32±0.12頭仔豬（N=701胎)。新生仔豬至少0.8公斤重且無明顯的外觀缺陷，而被剪耳刻留種者，是為健壯仔豬。CT型母豬平均每胎生產7.58±0.19頭健壯仔豬，而CC型母豬生產7.97±0.11頭健壯仔豬，顯示CRC突變基因會影響到母豬產仔能力，平均每胎減少0.4頭健壯仔豬（P＞0.08)。綜合上述結果，母豬帶有一個CRC突變基因而呈雜合型（CT）時，其初產日齡和胎距雖未受到CRC突變基因的影響，但其淘汰死亡率則較高，其每胎產仔數亦較少，故種豬場仍應僅選留CRC正常基因純合型（CC)母豬(張等, 1995a)。

豬基選：Ⅲ. 第六對染色體上CRC突變基因對公豬精液性狀之影響

公豬精液性狀測量是人工授精業務的日常工作，找尋精液性狀的遺傳標記是豬基選工作目標。本研究分析1993年9月至1995年3月期間來自19頭杜洛克、11頭藍瑞斯和10頭約克夏種公豬之有精液量、酸鹼值、精子濃度和精子活力的1096次記錄。每頭公豬至少有兩次的採精記錄。種公豬的第六對染色體CRC遺傳型經鑑別後，有26頭CC正常型、9頭CT雜合型和5頭TT突變型。精液性狀之變方分析以品種和CRC遺傳型為變方，其平均值±標準機差與差異性檢定列表於下：

變方

樣次

精液量

毫升

酸鹼值

精子濃度

億/毫升

精子活力

％

公豬品種

　杜洛克

　藍瑞斯

　約克夏

496

239

261

259± 4

260±12

214± 9

7.27±.01

7.34±.03

7.29±.02

2.12±.07

2.35±.20

2.80±.15

82±1

78±2

81±1

CRC遺傳型

793

230

248± 2

238± 6

248±14

7.34±.01

7.28±.01

7.28±.03

2.66±.04

2.17±.10

2.45±.24

81±1

80±1

80±2

公豬精液性狀有品種和CRC遺傳型差異性存在，暗示其影響基因可能在第六對染色體上，進一步利用聚合凴鏈鎖反應來分析第六對染色體上的微衛星型遺傳標記，將有助於早期選留人工授精用公豬(葉等, 1995)。

豬基選：Ⅳ. 選育GPI/PGD純合品系的抗緊迫母豬群

抗緊迫基因連鎖的遺傳標記GPI和PGD，不僅可供種豬血統登錄用，尚可藉選育GPI/PGD 純合品系來篩除緊迫基因。由於GPI和PGD均各有三種遺傳型AA、AB和BB，故在逢機配種族群和對偶基因連鎖遺傳下，兼具GPI和PGD純合型之逢機率為6.25％。抗緊迫豬群選育後的六家種豬場，計有1483頭藍瑞斯、568頭約克夏和766頭杜洛克種母豬，經頸靜脈抽血鑑別GPI和PGD遺傳型。按各場各品種分析兼具GPI和PGD純合型的母豬頭數所佔族群頻率，列出最高頻率的GPI/PGD純合型於下表：

場別

GPI/PGD純合型最多者

所佔族群頻率，％(族群母豬頭數)

藍瑞斯

約克夏

杜洛克

藍瑞斯

約克夏

杜洛克

BB/AA

BB/BB

BB/AA

AA/AA

BB/BB

21.4(117)

22.8(272)

15.4(298)

12.2(328)

24.6(289)

45.3(179)

15.4( 91)

18.8( 32)

23.1(147)

16.7(102)

12.6( 87)

23.9(109)

47.7(109)

8.8( 91)

15.1(166)

42.6(141)

28.9(156)

32.0(103)

六家種豬場的杜洛克種母豬群，均以BB/BB純合型居多；藍瑞斯種母豬群有五家以BB/AA居多，餘一家以BB/BB居多；而約克夏種母豬群則以BB/AA或AA/AA居多，各有三家。當以逢機率三倍18.75％為純合品系建立的標準，三個品種均有超出者，僅F場達到GPI/PGD純合品系選育目標。（農委會84科技-2.19-牧-25(1)計畫經費補助）(林等, 1995)。

豬基選：Ⅴ. 母豬第一對染色體上SW373遺傳型及初產仔豬數

遺傳標記SW373定位於第一對染色體近動情素接受體，故找尋其遺傳型和比較不同遺傳型母豬之初產仔豬數是本研究的目的。共計有108頭藍瑞斯、73頭約克夏和52頭母豬之核內DNA，經聚合瓩鏈反應，電泳分析其產物的 DNA 片段數，有1、2、4、5、6或7個片段，其族群頻率在藍瑞斯種母豬群分別為 89.9、0.9、6.5、0.9、0.9和0.9％；在約克夏種母豬群分別為32.9、35.6、17.8、13.7、0.0和0.0％；以及在杜洛克種母豬群分別為69.3、15.4、11.5、1.9、1.9和0.0％。把有二個DNA片段數以上的母豬歸為多片段型，比較母豬具SW373遺傳型單片段型和多片段型之初產仔豬數（M±SEM）如下：

品種	SW373遺傳型	頭數	出生仔豬數	健壯仔豬數
藍瑞斯	單片段型	88	9.14±0.34	6.93±0.34
	多片段型	11	9.90±0.98	7.54±0.96
約克夏	單片段型	20	8.80±0.72	7.60±0.71
	多片段型	40	9.00±0.51	7.25±0.50
杜洛克	單片段型	30	8.30±0.59	7.00±0.58
	多片段型	15	8.53±0.83	7.06±0.82

具SW373單片段型和多片段型母豬之初產仔豬數分別為8.41±0.33和9.14±0.46頭(P＞0.20)，健壯仔豬數分別為7.17±0.32和7.28±0.45頭(P＞0.84）。初步結果顯示SW373遺傳型為多片段型者，其初產仔豬數略多，進一步鑑別其SW373遺傳組成之純雜性，或可有助於探討豬的多產基因(張等, 1995b)。

直接由聚合瓩連鎖反應產物來鑑別豬的緊迫基因Hal-1843突變點

豬緊迫基因Hal-1843突變點的商業上檢測法，通常是採用一對引子來進行聚合瓩連鎖反應，得到的DNA片段涵括Hal-1843突變點，再以限制瓩來分切。正常基因之Hal-1843的核甞酸為C，則因有分切點GCGC而能被分切為兩個片段。但若有Hal-1843突變點，則該分切點已突變為GCGT而無法被分切，仍為一個片段。這種檢測步驟不僅費時，而且無法從取樣、聚合瓩連鎖反應、電泳呈相到鑑別基因型之一貫流程完全自動化。若能重新設計聚合瓩連鎖反應的條件和所需的引子，讓聚合瓩連鎖反應後的產物早已隨基因型不同而有不同的產物，如此就可免除限制瓩分切步驟，而可完全自動化檢測Hal-1843基因型。本試驗的聚合瓩連鎖反應所需引子有三種，第一種是針對正常基因而設計的短引子5’-CCTGTGTGTGTGCAAT

GGTGTGGCCGTCC-3’，第二種是針對突變基因而設計的長引子5’-GTGCTGGATGTCCTGTGTTCAATGTGTGTGTGCAATGGTGTGGCCGGGT-3’，以及第三種引子是共用的互補引子5’-CTGGTGACATAGTTGATG

AGGTTTGTCTGC-3’。當長引子和短引子使用量比為1：1、1：2、1：4或2：3時，以2：3為最適量。聚合瓩連鎖反應的第一循環為94℃ 60秒、69℃ 60秒和72℃ 60秒，而後增幅次數為40次(94℃ 30秒，69℃ 45秒，72℃ 45秒)，最後煉合為72℃ 5分。聚合瓩連鎖反應產物經電泳呈相後僅有114 bp片段者為Hal-1843 CC正常型，而僅有134 bp片段者為TT突變型，同時有114 bp和134 bp兩個片段者為CT雜合型。利用引子3’端最末一個核甞酸和突變點核甞酸一致所設計的短引子和長引子配對，在聚合瓩連鎖反應中與互補引子依基因型而產生應有的DNA片段，這種直接由聚合瓩連鎖反應產物來鑑別基因型之技術，是一項突變點拆離式聚合瓩連鎖反應，簡稱MS-PCR。使用MS-PCR來鑑別67頭盤克夏豬、29頭保種族群的小耳種蘭嶼豬、30頭小體型選育的小耳種蘭嶼豬和20頭梅山豬，分別有40.3％(27/67)、6.9％(2/29)、0％(0/30)和0％(0/20)的豬帶有突變基因。有一頭盤克夏豬為TT突變型，其餘均為CT雜合型。MS-PCR的應用可促進豬緊迫基因型自動化檢測儀器的研發，種豬業者亦可自行應用此技術大量地篩檢全場豬隻(吳等, 1997)。

Hal-1843基因型對盤克夏種母豬初產性狀之影響

豬緊迫基因Hal-1843的單點突變對自美國進口的盤克夏種母豬繁殖性能是否有影響，將是盤克夏豬種的純種選育與生產肉豬計畫的關鍵點。本研究檢測自美國進口的盤克夏種女豬55頭之Hal-1843基因型，並追蹤這些女豬達兩歲齡時之繁殖性狀。Hal-1843基因型有CC正常型、CT雜合型和TT突變型等三種，分別有31、23和1頭女豬。於1997年8月22日止，仍有23頭女豬未有初產記錄。依Hal-1843基因型為CC、CT或TT的女豬分類，則各有64.5％(20/31)、52.2％(12/23)和0.0％(0/1)的女豬已產下第一胎。初產母豬32頭的初產性狀，受到與配公豬Hal-1843基因型之影響列表如下：

公豬基因型	母豬基因型	初產胎數	初產日齡	初產總仔數	初產活仔數
CC	CC	15	436±18	6.33±0.53	5.00±0.54
CC	CT	6	477±29	6.16±0.83	4.66±0.86
CT	CC	5	441±31	7.80±0.91	6.80±0.95
CT	CT	6	519±29	7.33±0.83	6.83±0.86

CC型母豬的初產日齡為438±18天(N=20)，而CT型母豬為498±20天(N=12)，統計上CT型母豬的初產日齡較CC型母豬者延遲了60天(P<0.05)。兩種基因型母豬的初產總仔數並無顯著的差異，分別為7.06±0.53頭(CC型)和6.75±0.59頭(CT型)，而初產活仔數亦無顯著的差異存在，CC型母豬產有5.90±0.54頭活仔豬，CT型母豬產有5.75±0.61頭活仔豬。CC型母豬群已有40％(8/20)產下第二產，但CT型母豬群則僅有16.7％(2/12)產下第二產。綜合上述結果，Hal-1843突變基因影響到盤克夏種母豬的初產日齡和再次配種受孕的能力(劉等, 1997)。

豬的造骨蛋白基因之基因頻率

豬的造骨蛋白(Osteopontin)基因位於第8號染色體的長臂末端，造骨蛋白的分子量為67 kDa。骨母細胞是分泌造骨蛋白的主要細胞，但行使免疫反應的巨噬細胞和激活的T細胞，以及傷口癒合前的腎細胞和上皮細胞，均具有分泌造骨蛋白的能力。豬造骨蛋白基因的啟動區(Promotor region)存在有(TG)n雙核甞重複序列，是影響造骨蛋白基因轉錄速率的主要核甞序列。本試驗使用(TG)n雙核甞重複序列之前後的核甞序列為聚合瓩連鎖反應的引子，正向引子為5'-CCAATCCTATTCACGAAAAAGC-3'，反向引子為5'-CAACCCACTTGCTCCCA C-3'，經增幅35次(94℃ 20秒，60℃ 20秒，72℃ 20秒)後予以電泳呈相，得到101至143 bp大小的八種DNA片段。在檢測的746頭豬隻中分別有9、112、447、152、108、102、34和2頭豬具有143、137、129、123、120、117、112或101 bp片段。依受檢豬的品種可列出各DNA片段的頻率於下表：

品種	受檢頭數	具有下列DNA片段(bp)的個體數百分率
品種	受檢頭數	143	137	129	123	120	117	112	101
藍瑞斯	354	0.00	13.28	67.51	19.49	10.73	6.50	0.85	0.00
約克夏	131	4.58	26.72	51.15	18.32	16.79	24.43	16.03	0.76
杜洛克	111	0.90	14.41	49.55	22.52	35.14	23.42	3.60	0.90
盤克夏	57	3.51	12.28	68.42	15.79	1.75	19.30	7.02	0.00
梅山	20	0.00	0.00	65.00	25.00	10.00	0.00	0.00	0.00
蘭嶼
保種族群	24	0.00	8.33	54.17	37.50	4.17	0.00	0.00	0.00
選育族群	27	0.00	18.52	62.96	18.52	0.00	0.00	0.00	0.00
迷彩	22	0.00	0.00	18.18	27.27	22.73	45.45	9.09	0.00
頭數	746	9	112	447	152	108	102	34	2

DNA片段為單片段者視為純合型，而雙片段者視為雜合型，則在藍瑞斯、約克夏、杜洛克、盤克夏、梅山、保種用小耳種蘭嶼、選育用小耳種蘭嶼和迷彩等豬種的受檢豬中，具純合型者之比率分別為81.64、41.22、49.55、71.93、100、95.83、100和77.27％。除迷彩豬以117 bp純合型居多外，其餘豬種均以129 bp純合型居多，其次依序為123 bp、137 bp和120 bp純合型。雜合型以129/120和129/117兩型居多。造骨蛋白基因型在本試驗的746頭豬中，共計有28種，剛好符合八種對偶基因可組合成28種基因型的理論數值(廖等, 1997)。

造骨蛋白基因雜合型母豬之新生仔豬存活率

豬免疫反應中的巨噬細胞和T細胞會分泌造骨蛋白(Osteopontin)，使異物能被淋巴球粘著，俾利吞噬行為或免疫反應。造骨蛋白的分泌速率受到造骨蛋白基因啟動區的調控，而該區則涵括(TG)n雙核甞重複序列，致有多種對偶基因。本研究依經產母豬之造骨蛋白基因型區分為純合型與雜合型兩大類，進行仔豬存活率比較分析。仔豬存活率係以每胎新生仔豬於出生48小時後仍健壯存活者百分比表示之。同品種造骨蛋白基因純合型和雜合型母豬的產仔性狀比較如下：

品種	造骨蛋白基因型	胎數	窩仔數	活仔數	存活率
杜洛克	純合型	152	9.06±0.21	7.19±0.21	79.4±1.5
	雜合型	179	8.90±0.20	7.46±0.19	84.5±1.4
藍瑞斯	純合型	629	9.35±0.11	7.97±0.11	85.8±1.3
	雜合型	172	9.73±0.22	8.33±0.21	85.6±0.7
約克夏	純合型	144	9.00±0.23	7.10±0.22	79.4±1.6
	雜合型	273	9.94±0.17	8.26±0.16	84.4±1.1

約克夏種母豬具雜合型造骨蛋白基因者，仔豬存活率之平均為84.4±1.1％，顯著地較純合型母豬之仔豬存活率79.4±1.6％為高(P<0.013)。當依產次來比較仔豬存活率時，純合型和雜合型約克夏母豬之第一產至第三產的仔豬存活率相差不顯著，但自第四產起至第七產則相差顯著。至於杜洛克種母豬則僅在初產時發現雜合型母豬之新生仔豬存活率顯著地高於純合型者(P<0.015)，第二產相似，自第三產起至第七產雖然仍是雜合型母豬所生的仔豬存活率較高，但並不顯著。藍瑞斯種母豬則自第一產至第七產均無基因型差異顯著性存在。雜合型種母豬與配公豬的基因型對仔豬存活率之影響被視為逢機時，則差異顯著水準P值乘以2後，該P值仍少於0.05的顯著水平，故杜洛克種和約克夏種母豬的造骨蛋白基因型影響到其所生仔豬存活率仍存在。造骨蛋白基因被視為是仔豬存活率的遺傳標記，將在豬基選計畫中列為抗病育種的遺傳標記之一(張等, 1997)。

參考文獻

吳明哲、廖仁寶、張秀鑾。1997。直接由聚合瓩連鎖反應產物來鑑別豬的緊迫基因Hal-1843突變點。中國畜牧學會會誌26(增刊)：70。

吳明哲。1990。科技化的家畜禽遺傳育種。台灣省畜產試驗所專輯第8號。共34頁。

林德育、倪靜華、吳松鎮、劉錦條、高瑞娟、劉瑞珍、吳明哲、張秀鑾。1995。豬基選：Ⅳ. 選育GPI/PGD純合品系的抗緊迫母豬。中國畜牧學會會誌24(增刊)：121。

張秀鑾、吳明哲、廖仁寶、劉錦條、賴永裕。1997。造骨蛋白基因雜合型母豬之新生仔豬存活率。中國畜牧學會會誌26(增刊)：116。

張秀鑾、林德育、高瑞娟、吳松鎮、劉錦條、賴永裕、倪靜華、張嘉豐、劉瑞珍、吳明哲。1994。豬基選：Ⅰ. 種母豬群之遺傳純合度評估。中國畜牧學會會誌23(增刊)：114。

張秀鑾、倪靜華、林德育、高瑞娟、賴永裕、吳明哲。1995b。豬基選：Ⅴ. 母豬第一對染色體上SW373遺傳型及初產仔豬數。中國畜牧學會會誌24(增刊)：122。

張秀鑾、高瑞娟、賴永裕、吳明哲。1995a。豬基選：Ⅱ. 第六對染色體上CRC突變基因對母豬繁殖之影響。中國畜牧學會會誌24(增刊)：120。

張秀鑾。1993。台灣地區豬隻品種改良近況。台灣農業 29(5)：42-63。

葉力子、但昭誠、許瓊瑛、高瑞娟、張秀鑾。1995。豬基選：Ⅲ. 第六對染色體

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