乳牛配種或人工授精(AI)後，若能儘早確認懷孕，可減少空胎損失，改善繁殖效率及牧場收益。目前乳牛之懷孕診斷主要仍以直腸觸診或應用超音波儀器進行，如果乳牛AI後，能夠早期測定懷孕時胎兒-母體間的特定成分而診斷懷孕，亦為可行之懷孕指標。在國外，參與乳牛群改良計畫(DHI)所採之乳樣若能發揮更大用途，結合測乳員採樣與記錄測乳資訊外，若配合進行乳樣懷孕診斷，將具有不需長時間固定或捆綁牛隻、非侵入性干擾牛隻、無需額外寄送樣品與勞力費用、診斷結果快速可靠(樣品寄送後48小時內完成檢測)、同時檢測乳成分及懷孕等優點，檢測後DHI資料處理中心將結果報表回傳牧場，或依酪農需要以伊媚兒(email)傳送。將懷孕診斷納入測乳工作之一，透過空胎牛早期診斷，降低牛群產仔間隔，一舉數得。配合作業軟體，測乳時系統會自動記錄牛隻相關資料，也會自動提醒測乳員採樣供診斷懷孕之用。

　　在1982年，牛懷孕-相關醣蛋白(Pregnancy-associatedglycoprotein,簡稱PAG)首次被確認出來，在國外已成功開發針對PAG的商品化酵素免疫分析套組(ELISAkit)(例如IDEXX公司製造供血液或乳樣懷孕診斷套組，在AI後28天即可供懷孕診斷)，供牛、羊等反芻動物早期懷孕診斷之用，目前已成為牧場繁殖管理重要策略之一。PAG是屬於未活化天冬氨酸蛋白家族的成員之一，由反芻動物胎盤內的細胞所製造。以牛為例，PAG家族至少有22種轉錄基因及變異體存在，PAG在母牛懷孕15至35天會增加。而好的懷孕診斷法，應具備準確性、敏感性與特異性高等特點，以便能安全正確的診斷懷孕牛隻，避免診斷懷孕造成意外流產。檢測PAG診斷懷孕，亦可配合傳統直腸觸診及超音波診斷二種方法確認互補，並評估早期懷孕的胚胎損失，改善繁殖效率與牛群健康。

　　應用ELISA套組檢測血液或乳樣中的PAG，乃使用可特異辨識樣品中PAG的單株抗體固定於套組的微滴盤孔內，經過反應作用後，再添加接合了訊號擴增系統的2級-抗體做為偵測試劑，以酵素作用受質做為呈色指示劑，使樣品的PAG顯現出來，反應結束後以分光光度計於450nm波長下測定微滴盤孔之吸光度，結果以SN值(sample-negativevalue)表示(SN值的計算，是將樣品吸光度扣除樣品參考波長吸光度(S)及陰性樣品的吸光度(N)後校正而得)。血清樣品檢測結果若SN≧0.3則判定為懷孕，低於0.3則判定為未孕。乳樣檢測結果若SN≧0.15則判定為懷孕，低於則判定為未孕。結果介於0.1與0.15間則需再檢測。Byrem等人(2015)在A與B二個牧場分別測試192頭及120頭乳牛的血清與乳樣配對樣品，這些母牛在產後60天，AI後40天至開始測試，分別採樣到懷孕227天及243天。除了採集血清及乳樣外，並輔以直腸觸診與超音波確診懷孕。結果發現母牛在懷孕期間乳中之PAG的變化如圖1所示，在AI後24天之乳樣即可測得PAG，且整個懷孕期間PAG均維持上升的趨勢。

圖1. 荷蘭牛在整個懷孕期間乳中PAG水準的變化 (資料來源：Byrem et al., 2015)

　　所有母牛在產仔後60天且在配種之前，乳中PAG水準均低於臨界值。顯示在產後PAG快速降低，特異性達100%。而A與B二牛群母牛之乳樣經套組測試，敏感性與特異性分別達到99.4%及100％、97.2%及100％，A與B牛群之乳樣與血樣分析結果相符程度分別達94.5%及100％。研究結果顯示，在整個懷孕期間早期檢測乳樣診斷乳牛懷孕之準確率高，且獲得之結果在敏感度與特異性方面均與血清樣品所獲結果相似，顯示其商品化應用之可行性。應用套組早期診斷乳牛的懷孕狀況，可以使牛乳生產及收益最大化，減少空胎日期，估計節省成本達5美元/天，且經由儘早淘汰牛群中繁殖性能不佳之母牛而改進繁殖效益。而相同乳樣可同時檢測例如Johne´sdisease等疾病，樣品送達實驗室後數小時即完成檢測，亦可改善牛群健康。因此，若能將DHI之乳樣發揮較大的功能，可以減少牧場相關的採樣與人力操作成本，不會額外造成牛隻的侵入傷害，是未來DHI可以發展的方向，藉以降低成本，增加牧場收益。