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乳牛懷孕診斷套組：
懷孕快篩檢測vs.懷孕相關醣蛋白檢測
新竹分所 李佳馨、楊明桂、葉亦馨、王思涵 編譯
乳牛產業的改進有賴於良好的育種管理及人工授精（AI）實施。而早期的妊娠診斷是縮短產犢間隔的關鍵因素，讓飼養管理人員能越早了解未懷孕的母牛，在相對較短的時間內進行問題牛隻處理或重新配種。早期懷孕診斷有助於提高乳牛場繁殖效率及收益成本的管理。
目前，最常使用傳統乳牛懷孕診斷方法，如超音波檢查及直腸觸診。對於直腸觸診，在AI後30-35天之前準確診斷懷孕狀態可能很困難；而經獸醫直腸超音波檢查母牛懷孕率，在懷孕期小於33天時準確性降低。在懷孕早期診斷中，放射免疫測定法（radioimmunoassay,
RIA）和酵素免疫分析法（Enzyme-linked immunosorbent assay,
ELISA）通常用於檢測牛血樣中的懷孕相關醣蛋白（pregnancy-associated glycoprotein, PAG）*，並且這兩個檢測方法亦具有敏感性和特異性。最近，大量的研究集中在利用RIA或ELISA檢測進行早期懷孕診斷，其懷孕率評估效力已被接受。但是，這兩種技術都需要昂貴的儀器設備、專業人員、嚴格的規範和專門的實驗室來評估樣品。這些條件對於使用牛懷孕快篩檢測試劑（Bovine
Pregnancy Rapid Test, BPRT）測試進行的懷孕診斷是不需要的，BPRT檢測可以在現場條件限制和短時間內（10分鐘）內同時分析許多樣本。
本篇報告是Moussafir等人於2018年的研究結果，了解在AI後30至40天的奶牛早期懷孕診斷中比較牛懷孕快篩檢測BPRT（Ubio
quickVET）和商業PAG-ELISA檢測（Bovin Preg Test DG29）之差異性。
*懷孕相關醣蛋白（PAG）為分泌型胎盤絨毛膜產物，屬於天冬氨酸蛋白酶超級家族。它主要由存在於滋養層表面層之雙核和單核細胞所合成的。在不同的懷孕期間可分泌約超過
20 種 PAG。這些蛋白質在早期妊娠診斷具有特異性和可靠的生物標誌物。
表 1 中的數據總結了在 212 頭乳牛中使用 PAG-ELISA 檢測和 BPRT
進行懷孕的診斷，包括懷孕，未懷孕以及無法辨別結果之乳牛頭數間的懷孕評估交互作用關係。使用PAG-ELISA 檢測，結果顯示 212 頭牛中有 140
頭被診斷為懷孕， 56 頭為未懷孕；在使用 BPRT 時，125 頭乳牛被診斷為懷孕，76 頭乳牛被診斷為未懷孕；BPRT 和PAG-ELISA
試驗分別有 11 頭和 16 頭乳牛為無法辨別結果。整體試驗為確保懷孕診斷之準確性，並於第 45±3 天進行的超音波檢查，212 頭乳牛中有 135
頭乳牛被確診為懷孕；其中 BPRT 試驗有 7 例假陽性診斷和 14 例假陰性診斷，而PAG-ELISA試驗有12例假陽性診斷並且沒有發生假陰性診斷（表1）。
表2中的數據用於計算PAG-ELISA和BPRT檢測的懷孕結果的敏感性、PPV、NPV和準確性。為了評估AI後30至40天的懷孕診斷準確性，將檢測後的結果與AI後45±3天直腸超音波檢查評估的結果進行比較（表
2）。 PAG-ELISA的敏感性為100％，BPRT試驗為89.4％；而PAG-ELISA和BPRT試驗的NPV分別為100％和81％，與兩種試驗的PPV相比（分別為91％和94.4％）。AI後30-40天PAG-ELISA和BPRT測試的總體準確性分別為94％和90％。
本研究中測試的準確性，在AI後30-40天，PAG-ELISA和BPRT測試分別為94％和90％。Silva等人（2007）研究在AI後27天用PAG-ELISA進行懷孕診斷的準確性為94％-96％。Ricci等人（2015）在AI後32天使用類似測試，研究顯示使用PAG-ELISA測試的92％的準確性。Zoli等人（1992）研究顯示，在AI後35天使用PAG-RIA的準確性為94.7％，這與使用
PAG-ELISA檢測獲得的結果類似，並且與本研究中使用BPRT測試獲得的結果相似。總體而言，本研究中使用PAG-ELISA和BPRT檢測的結果與前人的研究結果一致。BPRT需要考慮一些限制因素，例如在AI後40天後進行測試。在本研究中，兩種檢測的準確性（94％和90％）之間的差異可能是AI（30-40）之後不同日期收集樣本的結果，換言之，檢測的準確性隨著懷孕的天數增加也隨之增加。
綜合上述，BPRT和PAG-ELISA試驗的使用已被證明是在AI後30至40天收集的血漿樣本中用於懷孕診斷的方便且可靠的方法。這項研究的結果證實，
BPRT試驗是一種準確的方法，可能用於取代PAG-ELISA試驗，需要在補充試驗中進行證實，以便在30天後檢測母牛早期懷孕診斷。
參考文獻：
Moussafir, Z., L. Allai, K.E. Khalil, A. Essamadi and B.E. Amiri.
2018. Could abovine pregnancy rapid test be an alternative to a commercial
pregnancy- associated glycoprotein ELISA test in dairy cattle? Anim. Reprod.
Sci. 192: 78-83.
Ricc, A., P.D. Carvalho, M.C. Amundson, R.H. Fourdraine, L. Vincenti and
P.M. Fricke. 2015. Factors associated with pregnancy-associated glycoprotein
(PAG) levels in plasma and milk of Holstein cows during early pregnancy and
their effect on the accuracy of pregnancy diagnosis.
J. Dairy Sci. 98: 2502-2514.
Silva, E., R.A. Sterry, D. Kolb, N. Mathialagan, M.F. McGrath, J.M. Ballam
and P.M. Fricke. 2007. Detection of pregnancy by radioimmunoassay of a novel
pregnancy-specific protein in serum of cows and a profile of serum
concentrations during gestation. Biol. Reprod. 35: 936-942.
Zoli, A.P., L.A. Guilbault, P. Delahaut, W.B. Ortiz and J.F. Beckers. 1992.
Radioimmunoassay of a bovine pregnancy-associated glycoprotein in serum: its
application for pregnancy diagnosis. Biol. Reprod. 46: 83-92.
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