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SINCE 1969	建酪知訊	880916 第 5 期 建盈(股)公司  研發部
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為什麼我們要推薦您用溫水來解凍冷凍精液

【前言】

　　在嚴格控制的實驗室研究下顯示；從冷凍至解凍的過程中，解凍速率對於精子的存活數目，有很大的影響。相關的主要研究，是在法國以及美國的兩個州立大學(賓州州立大學和維吉尼亞州綜合技術學院)進行完成。在這三個研究計劃中，都採用了不同的方法來評估解凍速率的快慢，以及使用不同的稀釋劑和不同的冷凍速率會有甚麼不一樣的結果。總之，當評估這三個研究的結果時，出現一個很明顯的結論：那就是解凍的速率愈快，結果愈好。將解凍水浴(杯)裡的水溫增加時，解凍速率將隨之增加。當解凍溫度超過 35℃時，溫度的控制一定要非常正確，並且要非常精確地計算待解凍精液麥管在解凍杯裡的最長浸泡時間，這點非常的重要。例如：以下是一些相對的使用時間和溫度；50℃-最多 15秒；65℃-最多7.5秒；75℃-最多 6秒。假如精液解凍溫度太高，又浸泡太久，對精子會發生非常嚴重的傷害，因而顯著影響受胎率。

　　這些研究是在非常嚴格控制的實驗過程下完成的。一個人工授精師必須能夠了解這些研究結果，並設法改良後再實際應用於現場。

　　透過更多、更精良的研究，許多種強化實驗方式也被用來評估精液和受胎率之間的關係。在實驗室培養器中，精蟲老化的特性，似乎是評估受胎率的最佳樣本。精蟲的老化研究，是將精液放在設定為體溫的培養器之中，再測量具有行進活動力 的精蟲百分比和尖體 (Acrosomes)完整(沒有改變)之精蟲百分比。精蟲之尖體是一個像帽子構造的東西，覆蓋在精蟲頭部前端。精蟲之尖體所包含的物質在受精過程中非常重要。當精蟲老化時，這個"帽子"將會腫脹，最後就脫落。假如老化的過程愈慢，那這些精蟲的受胎率就愈高。尖體可用特殊的顯微鏡來觀察，這是一種相位差的顯微鏡。活動力數值可由培養下的精蟲獲得，但完整尖體(沒有腫脹)的百分比與受胎率之間有著更高的關聯性。這些測試被用來評估不同實驗處理後的影響。第一個實驗項目之一，是就不同解凍速率對精蟲存活率的影響。以下就包括了從這些研究結果所獲得的一些事實，也讓 Alta 遺傳基因工程公司藉此來推薦如何操作冷凍精液的正確方法。

【AIta遺傳基因工程公司的研究】

　　文獻指出；解凍速率愈快時，所獲得的存活精蟲數將會增加。我們的目的是回答兩個問題：第一在我們所設定的條件之下(亦即：稀釋劑、公牛、冷凍速率和包裝系統)，這個結果是真的嗎 ?第二.冷休克(Cold Shock)對結果有什麼影響 ?在這項研究之前，我們感覺到我們能夠在精蟲的活動力這一方面，因為採用溫水來解凍，而得到一些改善。這是因為冷休克的問題在以往的研究 中都被忽略了。這是我們為何要使用溫水來解凍的主要原因。在正式推薦之前， Alta 公司先要確認藉由溫水解凍所獲得的好處，不會被因為粗心的操作過程所發生的冷休克而否定掉。

　　有一項研究，解答了有關解凍 Alta 公司的精液麥管的幾個問題。它把同一次射出的精液或 同一批冷凍的精液，分成四組方式解凍處理。第 一組是對照組：冷凍精液被放在 35℃水浴中解凍，類似於現在使用中的作法。第二組是使用空氣解凍組：精液麥管從液態氮移出後，放在實驗桌上面的紙巾上(實驗室的溫度是 22℃ )。第三組：讓精液麥管在冰水水浴中解凍30 秒。第 四組：與第一組差不多，是精液麥管在 35℃水浴中解凍，但當麥管中的精液達 35℃後，再讓它冷休克。最大的冷休克是讓已經解凍的精液，在未經正確重新冷凍的步驟下，冒然投入冰水水浴之中。這樣會讓麥管的溫度下降非常的快，而導致最大的冷休克狀況。此時假如該麥管又被冷凍了，那可能裡頭所有的精蟲也都死光了。

　　解凍之後，精液在 37℃下培養 3 小時。記錄下精蟲的行進活動力和計數完整尖體的數量。只要那一組的傷害愈大，那它的精蟲活動力數值就較低而完整尖體的數量也愈低。

　　這似乎是精蟲損傷與受胎率之間，最敏感的測量方法。我們評估了 30 份樣品，每份樣品都作了這四種分組處理，也都做了行進活動力和尖體完整與否的精蟲兩項檢查。總計產生 240個數值。( 30 × 4 × 2 = 240 )

　　這項研究結果顯示於圖 1 和 圖 2。每一個實驗組所得到的結果，都分別與 35℃ 水浴解凍的對照組來比較其尖體部份完整性和行進活動力。當與對照組比較時，精蟲恢復程度的百分比增加時以(十)，減少 時以(－)表示。

　　　　　　　　　　　　　　　　　　圖 1. 

不在 35℃溫水水浴解凍時，存活精液的降低百分比

　　將空氣解凍法與 35℃溫水水浴對照組比較時，減少了 58.4% 的完整尖體和 56.7%活動力；將冰水解凍與對照組比較時，減少了 41.1%的完整尖體和 48.9%活動力；將冷休克組與對照組比較時；則減少了 20%的完整尖體和 26.9%活動力。

　　我們的研究結束由 P.L.Senger 博士在威斯康辛州州立大學的實驗室所補強。Senger博士作了 一項非常相似的研究，也同樣証實了冷休克對精液在 35℃ 溫水和冰水中解凍的影響。

【我們的推薦】

　　基於這些研究結果，Alta 公司要求人工授精師們，務必將冷凍的精液麥管(不論是0.5ml/管或 0.25mI/管)，都必需放在 35℃溫水中水浴(在解凍杯裡)解凍至少 30 秒。然後，再進行你通常所作的配種程序；一定要確保精蟲不會遭受冷休克。

【問題和解答】

　　Q. 基於先前所提到的研究，假如 35℃是好的，那以 75℃ 的水浴解凍會不會更好 ? 

　　A. 不會。這需要非常嚴格的水浴溫度控制和浸泡時間－ 6 秒。假如解凍的時間延至  8秒，它的高溫將會造成精液的損傷。又假如精液麥管在 6 秒前被移開，它又會暴露在冷休克或甚至重新冷凍狀態，因為在寒冷的冬天，人工授精師無法得到足夠的保護時間來裝填授精槍。但使用 35℃水浴，人工授精師才有時間避開極冷的氣候去移動精液麥管、擦乾它和裝填授精槍。

　　Q. 為什麼我不能直接將麥管放到口袋中解凍，或直接將麥管裝填到授精槍中，再注入母牛體內任其解凍 ? 

　　A. 這些方法的解凍速率，對獲得最適宜的精蟲恢復程度而言都太慢了。冷凍精液必須能夠快速通過解凍期間的溫度範圍，不然損傷將會發生。注意看圖 3 的圖形，你就可以了解解凍過程中精液麥管的溫度如何改變 ? 上面三條線代表冰水解凍、用紙巾包裹在 24℃ 空氣中解凍 (類似於放在口袋中)和 35℃ 溫水水浴解凍。解凍時，假如冷凍精液能夠快速通過臨界區，其精蟲恢復程度就愈好。放在口袋中解凍的方法，會隨著地點、季節不同而有不同結果。將精液麥管裝填於授精槍，之後還要將它注入母牛體內的過程，不可避免的讓麥管一 陣又一 陣的重覆慢慢解凍。沒有人願意丟掉二分之一 劑量的精液，但這就是以空氣解凍法時，在精液恢復程度的損失(58.4%)(與 35 ℃水浴解凍比較)。

圖3.

　　Q. 我多久該檢查解凍杯溫度？該如何讓每次都正好 35℃？

　　A. 每次解凍前，解凍杯的溫度都必須要用溫度計檢查。解凍杯的溫度應該設定在35C。但是，我們知道在現場很難做到這點，所以要設定溫度範圍並且嚴格遵守。這個範圍是讓解凍杯的溫度不低於 33℃，也不高於 37℃。假如你讓解凍杯的水溫太冷，那你正在浪費掉可能的精蟲恢復程度。假如你讓解凍杯的水溫太熱，那你會"煮"了精液，同時也減少了每次人工授精時的活精子數目。請您務必隨時校正或檢測所使用的溫度計是否合於標準。

　　Q. 我必須一直擔心冷休克嗎？

　　A. 一定要！假如你不去預防它，冷休克和精液再冷凍的狀況都會發生。這就是為什麼在極端寒冷的氣候下，要等到人工授精師能夠在保護精液麥管的情況下，裝填到他的授精槍當中，才可以讓精液麥管離開解凍杯。這項研究並沒有說：『不必擔心冷休克。』雖然在用冰水解凍的最大冷休克下，你還是可以得到 41.1%恢復程度的精液，但為何不讓它成為 90%呢？

　　Q. 解凍後，我可以等多久，再使用冷凍精液而不會有問題？

　　A. 最長15分鐘。精液待在母牛生殖道外愈久，它們的生存能力就愈差。已解凍的精液細胞正在耗費無可取代的珍貴的細胞成分。在解凍後，最好的情況是；有活力的精子已經注入母牛生殖道中，而不是待在解凍杯中，眼睜睜的看著您牧場中的發情母牛們乘駕來乘駕去！。

認識造成下痢的病原菌

---- 生病的仔牛是了解何種病菌侵入的線索

【前言】

　　近年來，任何一位飼養仔牛的人，都必須也曾經面對仔牛下痢的問題。也因為如此，所以美國農業部 (USDA)的調查顯示；仔牛下痢是最重要的美國仔牛疾病，這結果就毫不令人驚訝了。

　　國家乳用女牛評估計劃小組在全美 28個州，總計超過 1,800個牧場的調查也指出；在超過半數以上的牧場中，下痢都是最常見的仔牛疾病。

　　下痢會由多種因素所造成。事實上，下痢代表仔牛對消化道中的代謝不順或不平衡的反應。感染腸道的致病微生物們通常會破壞腸道上皮細胞。繼而將細胞的碎屑、蛋白質、酸類和礦物質釋出而進入腸道之中。

　　當受損腸道達一定規模時，腸道的礦物質平衡就會失序，仔牛此時的反應就是讓水份進入腸道以重新建立平衡。結果結合了糞便，水份，粘液和偶而會有的血液，就被統稱為下痢。除了水份之外，牛也會流失諸如鈉、氣、鉀和重碳酸鹽等電解質；因而造成體內過酸症 (Acidosis)(血中 pH 質過低)而死亡。(譯者註：因此仔牛下痢時、除了選用正確的化學藥物，例如建盈公司推薦的【喜安莫炎】針劑和【奧喜樂】泡水粉劑，以殺滅大腸桿菌、沙門氏桿菌等入侵的細菌之外，還必須適度點滴林格氏液，以補充水份及電解質)。

　　下痢也可能是由所感染的病原菌，或不完全消化的養份所產生的毒素所造成。小牛代奶粉中的蛋白質、脂肪或碳水化合物品質低下或將成份中的濃度改變(例如由全乳質奶粉改為非全乳質奶粉)都可能會造成下痢。

【感染性下痢較為嚴重】

　　由一種或多種感染性病原菌所造成的下痢類型、是很常見也是較為嚴重的情況。除了可能會有造成仔牛死亡的損失之外、治療的費用(包括電解質，抗生素等等)和人力支出費用都很昂貴。

　　下列幾種病原菌都能造成下痢；其感染及發病的經常年齡分佈也有說明。能夠確認何種病原菌造成您的仔牛生病是非常重要的一件事。

　　沙門氏桿菌(SalmoneIla)：許多種類的沙門氏感菌都會造成下痢。但是最常見到的是沙門氏傷寒桿菌(S.typhimurium)。雖然仔牛最常發生沙門氏桿菌感染的年齡是在 1-4週齡時，但是其最早於 4日齡時就會感染仔牛而造成下痢。

　　主要的感染來源來自受污染的飼料和牧場中己經遭受感染的其它動物。爆發沙門氏桿菌症會造成很大的經濟損害。徹底消毒牧場設施並將仔牛隔離是防範沙門氏桿菌的最好辦法。 (譯者註：徹底消毒時，請選用建盈公司推薦，並經實驗証明對沙門氏桿菌有強力效果的【洛華盛】或【萬毒滅】消毒劑 )。

　　由於沙門氏桿菌一般是感染 4週於以下的仔牛，因此新生仔牛攝食的初乳量多寡會影響牠們的抵抗力。同時也已經開發出對沙門氏桿菌有效的菌苗，及一些抗生素。沙門氏桿菌能夠轉移給人，所以畜主千萬不要掉以輕心。一定要將罹病仔牛隔離，照料牠們時也要特別小心。(譯者註：治療仔牛沙門氏桿菌症，請選用建盈公司推薦的【喜安莫炎】針劑或 【奧喜樂】泡水粉劑 )。

　　國家乳用女牛評估計劃小組在全美國對仔牛採樣的結果發現：沙門氏桿菌的最多發生率地區在美國東南部(佔樣品中的 3.4%)，而最少發生率地區在美國東北部(佔樣品中的 1.5%)。沙門氏桿菌的發生率也會隨著季節變化，最多發生的季節是在晚夏及秋天(3.6%)，最少發生在晚冬(1.2%)。您應該注意的是，上述由美國農業部所報告的發生率數據，指的是仔牛被感染的發生 率，並非一定要發病。有些仔牛可能為沙門氏桿菌的帶原者，但是並不表現出任何臨床症狀。

　　年齡也有它扮演的角色。沙門氏桿茵的最多發生率是發生在仔牛生命的第 1 週齡期間(5.5% 的樣品呈陽性反應)，之後則下降。在 4 週齡時，只有1.2%的樣品呈陽性反應。這很清楚的表示，沙門氏桿菌會很快攻擊仔牛，所以愈年幼的動物風險愈大。但是，老牛身上也會發現沙門 氏桿菌的存在…年老動物通常即為牧場中的沙門氏桿菌來源。

　　大腸桿菌(Escherichia coli)：大腸桿菌會造成兩種不同的疾病狀況；一種為敗血症(Septicemia)，另 一種為內毒血症(Enterotoxemia)。

　　當大腸桿菌到達小腸位置，但仔牛仍尚未吃到初乳，而沒有保護抗體時，就會發生大腸桿菌性敗血症(細菌在血中)。疾病發生的很快一仔牛通常表現出下痢、精神抑鬱和昏迷等症候，並且會在出生後 24-36 小時內死亡。這種型態的大腸桿菌症，能夠以儘早餵飼充足的初乳(儘可能在出生後 1小時之內給飼)及提供清潔、乾燥的分娩舍來避免之。

　　當大腸桿菌黏附在仔牛的小腸壁(通常在 7日齡以內)並且增殖時，大腸就會發生大腸桿菌性內毒血症(腸道中有細菌的毒素)。這些細菌產生毒素，逼得仔牛要將體內的水份移動到腸中，以“沖刷”毒素和細菌。大腸桿菌所引起的下痢呈大量的、水樣狀的、有時含有血液。

　　對付大腸桿菌的最佳防禦方式是徹底做好仔牛舍衛生消毒，並且仔牛出生後儘早餵飼初乳。(譯者註：徹底消毒時，請選用建盈公司推薦，並經實驗証明對大腸桿菌有強力效果的【洛華盛】或【萬毒滅】消毒劑 )。您也可以和您的獸醫師商量是否有任何有效的大腸桿菌菌苗能夠用來預防。

　　輪狀病毒(Rotavirus)：這個病毒主要在 1-2週齡時，造成仔牛下痢，但是可能 4 週齡的仔牛 糞材樣品中，都會有陽性反應。

　　輪狀病毒的感染通常造成輕度至中等程度的下痢，並且大部份的罹病仔牛能夠恢復正常。輪狀病毒廣泛分佈在環境中，並且對許多消毒劑具有抵抗性。

　　你能夠藉由在乾乳期間施打疫苗，使得仔牛藉由初乳中的抗體保護，而讓輪狀病毒感染的下痢病例降到最低。(譯者註：台灣地區目前尚無上市疫苗；請多忍耐！)。將罹病仔牛隔離，並改善通風也有幫助。

　　冠狀病毒(Coronavirus)：牛的冠狀病毒通常發生在3日齡至3週齡的仔牛，但有時達3月齡的小牛也會發生。本病毒的下痢呈大量化及水樣狀；很快會發生脫水及酸基不平衡現象(即過酸症)。和其它病毒比較上，本病毒所造成的死亡率較高。

　　仔牛通常因為吃了污染的墊料或糞便而感染，但也有出生就感染的垂直感染報告。較大的小牛或成年母牛都會帶原，再將本病毒傳給仔牛，所以將仔牛隔離飼養是很重要的一件事。將給飼器具清洗乾淨，對防範本病毒將大有幫助。

　　球蟲(Coccidia)：被Eimeria bovis及Eimeria Zuernii 等兩種球蟲感染而造成的下痢，大多發生在 4 週齡以後。仔牛可能遠早在 1 週齡時就已經感染了，但因為潛伏期大約需要 3 週，所以直到 4 週齡以後才有徵狀出現(下痢；往往含有血液)。

　　球蟲是透過仔牛攝食含有蟲卵的墊料或糞便所感染，所以衛生消毒和隔離是絕對必要的預 防措施。將仔牛獨自關於仔牛舍是很好的辦法。被攝食後，蟲卵(卵母細胞)會在腸道細胞內增殖，對腸壁造成很大傷害。

　　許多種抗球蟲藥的飼料添加劑都對球蟲有效。這包括拉薩羅 (LasaIocid)及孟寧素(Rumensin)。需要注意的是，因為在下痢發生之前，球蟲對仔牛腸壁的傷害已經造成了，所以必 需要在在仔牛開始下痢之前就使用抗球蟲藥，才是明智之舉。

　　隱胞子蟲(Cryptosporidium)：這種寄生蟲造成的仔牛下痢，通常是在第2和第3週齡。它可能是造成仔牛下痢的最重要病原。從第 4 週齡開始，隱胞子蟲所造成的下痢愈來愈少，因為仔牛已經發展出對抗的免疫能力。

　　雖然最近臨床顯示帕若莫黴素(Paromomycin)有效，但實際上現在在牛隻仍然尚未開發出有效對抗隱胞子蟲的藥方。所以最好的處理方式是補充電解質和耐心。假如沒有二次性細菌感染時，隱胞子蟲會在 5-10 天內清除。

　　幾乎所有的牛群都呈隱胞子蟲陽性反應，並且大約有一半的 1-3 週齡仔牛呈陽性反應。所以 目標要放在病原的控制和管理上。(譯者註：這是美國的調查)。

　　除了上述病原菌之外，還有其它的病原菌也會造成仔牛下痢。但是重要的是，這些重點摘 要可以幫助您了解何種病原菌侵入您的牧場。其中一項關鍵是由發病年齡來作基本判斷。但是記住，有時也會多種病原菌混合感染 !

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