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胚胎移植與產期調節

◎ 畜產試驗所產業組李佳蓉  生理組曲鳳翔、陳裕信  編譯

  在亞熱帶氣候下,泌乳牛的繁殖性能受夏季熱緊迫影響甚鉅,其背後有多重原因。除了在熱季採食量減少,能量負平衡導致下視丘- 腦下垂體- 卵巢軸活動不平衡,進而影響賀爾蒙分泌外,牛隻處於長期熱環境導致體溫過高,影響母牛卵巢細胞與受精卵發育。

熱緊迫對細胞的傷害
  
在母牛卵巢內,當濾泡直徑到達約0.5至1 mm 時,即開始對熱敏感(圖1),若此時受到熱影響,後續發育成中等大小的濾泡和排卵前濾泡時,類固醇生成都會較正常濾泡少。而當濾泡發育到第三階段,直徑約1.5 至2 mm 大小時,顆粒細胞(granulosa cells)分化形成壁顆粒層 (mural granulosa layers) 和竇顆粒層(antral granulosa layers) 以及卵母細胞周圍的卵丘細胞 (cumulus cells),此時下視丘控制的濾泡刺激素 (Follicle-stimulating hormone,FSH) 和黃體化激素(Luteining hormone,LH) 影響濾泡發育與排卵。在炎熱氣候下,LH 釋放被抑制,導致排卵前的LH 波峰不明顯,不僅可能出現不排卵的現象,亦影響卵母細胞成熟、降低卵母細胞受精和發育成胚胎的能力。體外試驗顯示,在母牛卵母細胞成熟過程中,暴露在牛隻熱休克溫度(40 - 41.5° C)會損害細胞骨架,導致大多數卵母細胞無法完全成熟。
  熱緊迫導致的FSH 和 LH 的失衡還影響濾泡波。牛隻卵巢每次發情週期有2 到3個濾泡波,每次濾泡波皆有一組濾泡成熟以及優勢濾泡出現,而優勢濾泡具有高雌二醇(Estradiol) 和合成抑制素的能力,抑制素可抑制其他濾泡的生長並抑制新濾泡波的出現。如果當前卵巢沒有成熟黃體,優勢濾泡可能會成為排卵濾泡,反之優勢濾泡無法成為排卵濾泡,無法成為排卵濾泡的優勢濾泡將走向閉鎖,以啟動新的濾泡波的生長。而熱緊迫降低了優勢濾泡的大小並減弱了濾泡優勢,導致大濾泡數量增加、雙排卵率增加以及讓優勢期的延長,進而使得排卵時間難以推算、人工授精受孕率下降。

  在受精卵方面,受精卵或2 細胞期胚胎暴露於熱休克溫度,胚胎中細胞骨架和線粒體定位改變,導致後續發育至囊胚階段的可能性降低。到了4 細胞和8 細胞階段的胚胎,對熱感受度逐漸下降,到了桑葚胚階段(themorula stage),胚胎對熱才有抵抗力。因此在受精後的第2 天,母牛體溫過高容易導致胚胎發育不良,但在受精後3 到7 天熱影響逐漸減緩,當胚胎在桑葚胚或擴張期時,胚已經獲得對高溫的抵抗力。所以常規胚胎移植技術使受胚牛植入第7 天的桑葚胚或囊胚時,胚胎發育受熱影響已逐漸減小。體外研究亦證實高溫對卵母細胞的影響,卵母細胞暴露於生理接近熱休克的溫度41.2° C 後,發育到囊胚階段的受精卵比例降低了15%。
  除了高溫本身對卵母細胞和受精卵的傷害,高溫誘導的氧化緊迫(oxidative stress)也被認為是破壞胚胎發育的原因之一,但致病機轉仍不清楚,而在日糧中添加維他命 E 等抗氧化劑,對減緩氧化緊迫所造成的影響不一定有幫助。

胚胎移植時程
  卵母細胞發育早期受到熱緊迫影響,後續成熟和發育能力皆會受損,而牛的濾泡直徑從0.13 mm 發育到排卵大小需要34天,即使天氣入秋泌乳牛不再處於熱緊迫狀態,受熱傷害影響的濾泡在秋天仍然存在。因此在長達數個月的熱傷害影響下,胚胎移植是有效提高夏季受孕率的工具—在較冷的月份洗出胚胎,並在卵母細胞質量受損的熱季及入秋時期移植受孕。
  即使新鮮胚胎移植的受孕率較冷凍胚受孕率高,暖季或熱季洗胚時,供胚牛會遇到熱緊迫導致濾泡動力學受損、優勢濾泡無法發揮其優勢、排卵前優勢濾泡的優勢持續時間延長、濾泡的類固醇生成能力降低等問題,影響後續卵母細胞的成熟和發育能力,進而影響超級排卵後產生的卵子數量、受精率以及可移植胚胎和可冷凍胚胎的百分比。

  於台灣每年12 月至3 月期間進行洗胚作業時,卵母細胞避開了熱傷害環境,洗出桑葚胚或囊胚已經繞過熱敏感期(圖2),當冷凍胚胎於夏季解凍植入受胚牛體內時,可大幅減少胚胎受熱傷害影響。國外研究顯示,熱季使用胚胎移植代替人工授精,第21 天的懷孕率可以提高8%。若能在國內6 至9 月進行移胚作業,增加受孕牛數,則能在次年夏季提高分娩數進而提升乳量。
  供胚牛選擇方面,除了選拔高產能母牛之外,可針對體溫調節能力進行選擇,除減少熱緊迫對供胚牛影響、讓耐熱性狀留存子代外,亦可增加健康胚胎產量。因此胚胎移植可迅速增加優良遺傳個體,還可以提高熱緊迫牛隻的懷孕率,保持全年的懷孕率,調整冬夏乳比。

參考文獻
Baruselli, P. S., R. M. Ferreira, L. M. Vieira, A. H. Souza, , G. A. Bó, and C. A. Rodrigues. 2020. Use of embryo transfer to alleviate infertility caused by heat stress. Theriogenology 155: 1-11.
Roth, Z. 2017. Effect of heat stress on reproduction in dairy cows: insights into the cellular and molecular responses of the oocyte. Annu. Rev. Anim. Biosci. 5: 151-170.



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